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本篇帶你了解一下多肽合成儀的運(yùn)行原理

更新時(shí)間:2022-12-19點(diǎn)擊次數(shù):1799
  多肽固相合成技術(shù)的發(fā)明同時(shí)促進(jìn)了肽合成的自動(dòng)化。第一臺(tái)真正意義上的多肽合成儀出現(xiàn)在1960年代末至1970年代初期,它是利用氮?dú)夤呐輥?lái)對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行攪拌,用計(jì)算機(jī)程序控制來(lái)實(shí)現(xiàn)有限度的自動(dòng)合成。即為后來(lái)總結(jié)歸納出的第一代多肽合成儀。
 
  雖然在攪拌方式和其他各項(xiàng)功能方面有著明顯的缺陷,但是它畢竟把人從實(shí)驗(yàn)室里解放出來(lái),極大地提高了工作效率,所以受到了多肽科學(xué)家的一致贊揚(yáng)。
 
  多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理,在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序(序列,一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端)不斷添加、反應(yīng)、合成,操作最終得到多肽載體。
 
  固相合成法,大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生,參加反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈都是保護(hù)的。羧基端是游離的,并且在反應(yīng)之前必須活化。
 
  固相合成方法有兩種,即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢(shì),現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成,但對(duì)于某些短肽,tBoc因其產(chǎn)率高的優(yōu)勢(shì)仍然被很多企業(yè)所采用。
 
  具體合成由下列幾個(gè)循環(huán)組成:
 
  1) 去保護(hù):Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去 除氨基的保護(hù)基團(tuán)。
 
  2) 激活和交聯(lián):下一個(gè)氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。活化的單體與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián),形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成。循環(huán):這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成。
 
  3) 洗脫和脫保護(hù):多肽從柱上洗脫下來(lái),其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑(TFA) 洗脫和脫保護(hù)。
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